Eutanasia, técnica de necropsia, toma y remisón de muestras

Conceptos:

Eutanasia : Eu: bueno; tanatos: muerte

Sacrificio: Tolera cierto sufrimiento del animal

Autopsia: Auto: uno mismo; opsia: observación

Necropsia: Necros: muerto; opsia: observación

Eutanasia

Criterios básicos

1) Menor estresante posible y con mínimo dolor.

2) Pérdida de la conciencia rápida e indolora.

3) “ Idiot proof ”

Criterios a evaluar

Generales

1) Rápido
2) Confiable
3) Seguro para el personal
4) Irreversible

Particulares

5) Compatibilidad con el motivo del sacrificio (dolor aceptable)
6) No impresionante para observadores
7) Compatibilidad con la especie
8) Que conserve los tejidos
9) Que utilice drogas de fácil adquisición
10) Económico
11) Que no desgaste el equipo
12) Que aisle de carroñeros

Mecanismo de acción de los agentes eutanásicos

1) Hipoxia (directa o indirecta)

2) Depresión neuronal directa

3) Disrupción de actividad cerebral

Agentes eutanásicos

1) Gases

2) Agentes químicos inyectables

3) Agentes físicos

1) Gases:

Generalidades: rápida perdida de la conciencia, si el equipo funciona bien y esta bien mantenido, la mayoría son levemenete peligrosos para el personal. No recomendados en neonatos o reptiles y anfibios

Anestésicos (halotano, enfluorano etc.)(N2O)

Dióxido de carbono (CO2)

Monóxido de carbono (CO)

Nitrógeno

2) Agentes químicos inyectables:

Generalidades: Método rápido para casos individuales, moderado estrés en sujeción e inoculación

Barbitúricos (tiopental sódico)

Generalidades: Rápido depresor del SNC. i.v. inconciencia en 20 seg. paro cardíaco en 5 min aprox.; i.p. aproximadamente 3 veces mas lento.

Ventajas: económico, rápido

Desventajas: Dificultad de la aplicación i.v., dificultad para conseguir la droga según leyes de cada país, severa esplenomegalia artificial.

Recomendado: en la mayoría de los casos, para bajo número de animales o casos individuales, no sirve para animales de consumo y se puede usar en combinaciones.

Combinaciones de barbitúricos

Se pueden combinar con cardiotóxicos, ej: Sn. saturada de cloruro de potasio, procaína 50% (Eutanasico equino ®), difenilhidantoína (Euthanyle ®) o agentes físicos.

Agentes físicos:

Generalidades: de uso rutinario para sacrificio de animales de consumo, por no dejar restos en carne y permitir un sangrado eficaz (legislación)

En tareas de laboratorio o toma de muestras de animales chicos

Dislocación cervical

Decapitación


Inductores de inconciencia

Concusión

Pistola de proyectil cautivo

Electroshock

Exanguinación:

Generalidades: debe ser utilizado con un inductor de inconciencia (concusión, electroshock, CO2, etc.)

Ventajas: No se contaminan los tejidos, permite sangrar bien carnes para consumo

Desventajas: puede ser estresante para los animales, desagradable a la vista, levemente peligroso para el personal.

Recomendado: En animales destinados a consumo

Armas de fuego:

Generalidades: rápido, el personal necesita estar bien entrenado, legislación

Ventajas: permite no acercarse o inmovilizar al animal

Desventajas: puede ser peligroso para el personal y las personas o animales en las proximidades (y no tan próximas), nociones de anatomía muy claras

Recomendado: Animales silvestres, animales agresivos, o con enfermedades zoonóticas

Microondas

(¡¡¡No es un horno convencional!!!)

Generalidades: muy rápido, muy caro

Ventajas: Rápido, no contamina tejidos, fija prácticamente in vivo al cerebro

Desventajas: Muy caro

Recomendado: Para piezas a procesar para neurobiología, cualquier otra aplicación de sacrificios individuales si se cuenta con el equipo

Link para descargar la guía de eutanasia:

http://www.avma.org/issues/animal_welfare/euthanasia.pdf


Necropsia:

Necros: muerto; opsia: observación

Cuando? Donde? Para que? Con que?

Lo antes posible

Lugar mas adecuado

Determinar causa de muerte, motivos: legal, familiar, prevención de rodeo o criadero

Elementos para la necropsia

Elementos para la necropsia

Vestimenta: ambo/overall, botas de goma, guantes de goma, o guardapolvo, cubrecalzado impermeable, guantes de cirugía

Elementos de apertura del cadáver: Cuchillo, chaira, tijera, bisturí, pinzas de mano izquierda, costótomo, sierra

Elementos para toma de muestra: Frascos, soluciones fijadoras, hisopos, tubos, medios de transporte, portaobjetos, papel, lápiz, alcohol, medios de transporte, cinta para rotular

Elementos de bioseguridad: Barbijo, anteojos

Extras: Cámara digital, grabadora

Alteraciones postmortem

1) Rigor mortis: Rigidez muscular que aparece después de la muerte, a medida que el ATP disminuye. Su velocidad de aparición varía con el estado nutricional previo, actividad previa, y temperatura. Aparece entre 1 a 6 horas. Desaparece a las 24 - 48 hs. por la desnaturalización proteica

2) Algor mortis: Enfriamiento gradual posterior a la muerte

3) Livor mortis - Congestión hipostática: Lividez cadavérica, coloración morado/azulada en partes declives

4) Palor mortis: Palidez cadavérica

5) Pseudomelanosis: sulfohemoglobina producto de la combinación de la Hb con SH2

6) Imbibición hemoglobínica y biliar

7) Autólisis postmortem: reblandeciemiento de los tejidos (no es necrosis! por definición)

8) Timpanismo postmortem: formación de gas en vísceras huecas con desplazamiento de vísceras

Técnica de necropsia:

Examen externo

Inspeccionar del pelaje, las plantas y uñas, pezuñas o cascos, y los orificios externos

Identificar ectoparasitos

Estado de nutrición (Obeso, sobrepeso, bueno, regular, malo, caquéctico)

Según la especie tumbar el animal sobre la espalda o un lateral (Rumiantes DLI, equinos DLD)

Determinar sexo y edad (formula dentaria)

Apertura del cadáver

Según la sospecha conviene en algunos casos invertir el orden, y/o tomar directamente muestras para cultivo o pruebas específicas (hemocultivo, cerebro, barro esplénico) antes de proceder a la necropsia completa

Efectuar un corte longitudinal a través de la piel, a lo largo de la línea media ventral desde la sínfisis mandibular hasta el ano, pasar el corte por un lado glándula mamaria o pene

Desollar la piel hacia los laterales en pequeños o lateral en grandes animales

En animales grandes: Cortar musculatura subescapular, músculos abductores y desarticular la articulación coxofemoral, voltear los miembros

En animales grandes: Cortar la pared abdominal en línea media luego hacia dorsal hacia el ala del ileon, luego paralelo a la columna hacia última costilla

Sacar musculatura del tórax y cortar las costillas en uniones costocondrales y articulaciones costovertebrales

En animales grandes: Sacar toda la pared lateral

En animales pequeños: Cortar por línea alba y por uniones costocondrales y retirar el esternón para exponer todos los órganos

Inspeccionar los órganos in situ.

Presencia de liquido, sangre u otro en cavidades?

Desarticular la lengua y separar esófago y traquea, corazón y pulmones hasta el diafragma y extraer los órganos de cavidad torácica junto con esófago, traquea y lengua.

Debridar el resto del tracto gastrointestinal, para extraer las vísceras abdominales

Extraer el bazo, extraer ambos riñones junto con sus glándulas adrenales

Extraer órganos reproductivos (hembras)

Cortar masas musculares del cuello, desarticular la cabeza y separarla del tronco

Inspección de vísceras

En cuanto a las vísceras es preferible trabajar por apartados, de lo mas limpio a lomas contaminado, es decir por último el tracto digestivo y empezando por el los sistemas respiratorio y cardiovascular

Inspección de aparato respiratorio, linfonódulos y apertura de corazón

Inspección de bazo, hígado, sistema urinario, sistema genital

Apertura del tracto gastrointestinal, inspección del páncreas y
linfonódulos mesesntéricos

Apertura del cráneo y extracción de cerebro y cerebelo

Toma y remisión de muestras

Análisis de laboratorio

Hematología y serología

Bacteriología / Micología

Virología

Parasitología

Histopatología

Citología

Toxicología

Genéticos

PROTOCOLO !!!!

A) Rótulo identificatorio: material enviado y el conservador o fijador utilizado

B) Información:

1) Datos del profesional
2) Datos del propietario
3) Datos del animal: especie, raza, edad, pelaje, sexo, marcas y señales/nombre
4) Datos de la muestra: fecha de extracción, zona de la cual se extrajo, y descripción macroscópica
5) Breve historia clínica: signos, evolución, tratamiento, estudios complementarios realizados
6) Morbilidad y mortalidad si es un rodeo o criadero
7) Diagnóstico presuntivo

C) Análisis requerido

Hematología y serología

Muestras a remitir: Sangre, plasma, suero.

Forma de envío:

Sangre con anticoagulante: refrigerada (4 -5 °C)

Plasma: refrigerado o congelado (-20°)

Suero: refrigerado o congelado

Frotis fijado al aire o con alcohol metílico

Observaciones: No dejar frotis al alcance de insectos

Anticoagulantes: EDTA 1mg/ml de sangre, Heparina al 1%: 0,5ml/ 5ml de sangre, Citrato de sodio: 0,5ml/ 5ml de sangre

Evitar hemólisis

Enfermedades infecciosas: enviar 2 muestras con 3 semanas de diferencia (titulación / serconversión)

Bacteriología

Muestras a remitir: trozos de órganos, líquidos corporales, secreciones, exudados, contenido estomacal e intestinal, sangre, hisopados, médula ósea

Forma de envío:

En recipientes, jeringas, tubos de ensayo estériles refrigerados (4-5°C)

En medios de cultivo comerciales

Observaciones: Animal muerto recientemente. Si supera las 3 o 4 horas tomar un hueso largo como muestra (septicemia).

Utilizar material estéril

Rociar con alcohol la superficie de los órganos a muestrear

Virología

Material a remitir:

Suero, líquidos corporales, exudados, órganos.

Forma de envío: Refrigeradas (4-5°C) o congelados (-20° C)

Consultar según el tipo de virus sospechado.

Observaciones:

Las muestras deben provenir de un animal muerto recientemente

Se deben tomar en el período agudo de la enfermedad

Suero: Tomar dos muestras del mismo animal con tres semanas de diferencia

Parasitología

Muestras a remitir y forma de envío:

Materia fecal: en frascos con formol al 5 %. (Pool o seriada de tres días)

Parásitos internos: en alcohol 70° o con formol al 5%.

Parásitos externos: en recipientes herméticos

Raspajes de piel: entre dos portaobjetos, porta y cubreobjetos, con vaselina líquida

Hemoprotozooarios: Frotis secados al aire y/o fijados con alcohol metílico. (Sangre periférica)

Histopatología

Recipiente de boca ancha y buen cierre (preferentemente de plástico)

Líquido fijador – Formol 10 % (o Formaldheído al 4%)
(si es bufferado mejor)

Muestra de 0,5 cm. (a 1 cm.) de espesor (feteada)

Material lo más fresco posible. Tomar tejido normal y tejido afectado

Temperatura ambiente, nunca congelar una pieza

PROTOCOLO !!!!

¿¿¿ Formol al 10% ???

Aldehídos fijadores: Formaldehído, Glutaraldehido, Paraformaldehido

Formaldehído (gas), 37 - 40 % en agua = Formol puro

Formol puro (Formaldehído 40%) 100 ml + Agua destilada 900 ml= 1 litro de formol al 10 %

Si agregan Fosfato monosódico 4 g y fosfato disódico 6,5 g = 1 litro de formol al 10 % bufferado

(No es TAN complicado, or is it?)

Citología

Material a remitir: Frotis o extendidos obtenidos por:

Improntas

Aspiración con aguja fina: con jeringas de 2,5 a 10 ml, y agujas hipodérmicas 20 a 25 gauge

Citología exfoliativa

Fluídos Improntas, swabs, raspajes, cepillados

Forma de envío: fijados al aire o con alcohol metílico.

Toma de muestra para citología. Que esperar ????? concientizar al propietario de los alcances de la técnica.

Toxicología

Muestras: Sangre heparinizada 10 ml- suero 5 ml- orina 50 ml- contenido estomacal- encéfalo- hígado- bazo- riñón- tejido adiposo (100 gr) alimentos, agua, plantas, y cualquier material extraño

Forma de envío: Recipientes limpios o bolsas de polietileno nuevas

Observaciones:

Especificar de qué tóxico se sospecha.

Enviar, si se puede, la fuente del tóxico.

En el caso de minerales: usar frascos químicamente limpios, tratados con ácido clorhídrico 10% durante 24hs y enjuagados varias veces con agua destilada.

Genéticos:

PCR: Polimerase chain reaction

Material a remitir: líquidos corporales, exudados, órganos, fragmentos de tejido

Forma de envío: Congeladas (-20° C o -196 ° C N2) -Consultar según el tipo de virus sospechado

Observaciones: Consultar con el laboratorio sobre todo por los primers con los que cuenten