Eutanasia, técnica de necropsia, toma y remisón de muestras
Conceptos:
Eutanasia : Eu: bueno; tanatos: muerte
Sacrificio: Tolera cierto sufrimiento del animal
Autopsia: Auto: uno mismo; opsia: observación
Necropsia: Necros: muerto; opsia: observación
Eutanasia
Criterios básicos
1) Menor estresante posible y con mínimo dolor.
2) Pérdida de la conciencia rápida e indolora.
3) “ Idiot proof ”
Criterios a evaluar
Generales
1) Rápido
2) Confiable
3) Seguro para el personal
4) Irreversible
Particulares
5) Compatibilidad con el motivo del sacrificio (dolor aceptable)
6) No impresionante para observadores
7) Compatibilidad con la especie
8) Que conserve los tejidos
9) Que utilice drogas de fácil adquisición
10) Económico
11) Que no desgaste el equipo
12) Que aisle de carroñeros
Mecanismo de acción de los agentes eutanásicos
1) Hipoxia (directa o indirecta)
2) Depresión neuronal directa
3) Disrupción de actividad cerebral
Agentes eutanásicos
1) Gases
2) Agentes químicos inyectables
3) Agentes físicos
1) Gases:
Generalidades: rápida perdida de la conciencia, si el equipo funciona bien y esta bien mantenido, la mayoría son levemenete peligrosos para el personal. No recomendados en neonatos o reptiles y anfibios
Anestésicos (halotano, enfluorano etc.)(N2O)
Dióxido de carbono (CO2)
Monóxido de carbono (CO)
Nitrógeno
2) Agentes químicos inyectables:
Generalidades: Método rápido para casos individuales, moderado estrés en sujeción e inoculación
Barbitúricos (tiopental sódico)
Generalidades: Rápido depresor del SNC. i.v. inconciencia en 20 seg. paro cardíaco en 5 min aprox.; i.p. aproximadamente 3 veces mas lento.
Ventajas: económico, rápido
Desventajas: Dificultad de la aplicación i.v., dificultad para conseguir la droga según leyes de cada país, severa esplenomegalia artificial.
Recomendado: en la mayoría de los casos, para bajo número de animales o casos individuales, no sirve para animales de consumo y se puede usar en combinaciones.
Combinaciones de barbitúricos
Se pueden combinar con cardiotóxicos, ej: Sn. saturada de cloruro de potasio, procaína 50% (Eutanasico equino ®), difenilhidantoína (Euthanyle ®) o agentes físicos.
Agentes físicos:
Generalidades: de uso rutinario para sacrificio de animales de consumo, por no dejar restos en carne y permitir un sangrado eficaz (legislación)
En tareas de laboratorio o toma de muestras de animales chicos
Dislocación cervical
Decapitación
Inductores de inconciencia
Concusión
Pistola de proyectil cautivo
Electroshock
Exanguinación:
Generalidades: debe ser utilizado con un inductor de inconciencia (concusión, electroshock, CO2, etc.)
Ventajas: No se contaminan los tejidos, permite sangrar bien carnes para consumo
Desventajas: puede ser estresante para los animales, desagradable a la vista, levemente peligroso para el personal.
Recomendado: En animales destinados a consumo
Armas de fuego:
Generalidades: rápido, el personal necesita estar bien entrenado, legislación
Ventajas: permite no acercarse o inmovilizar al animal
Desventajas: puede ser peligroso para el personal y las personas o animales en las proximidades (y no tan próximas), nociones de anatomía muy claras
Recomendado: Animales silvestres, animales agresivos, o con enfermedades zoonóticas
Microondas
(¡¡¡No es un horno convencional!!!)
Generalidades: muy rápido, muy caro
Ventajas: Rápido, no contamina tejidos, fija prácticamente in vivo al cerebro
Desventajas: Muy caro
Recomendado: Para piezas a procesar para neurobiología, cualquier otra aplicación de sacrificios individuales si se cuenta con el equipo
Link para descargar la guía de eutanasia:
http://www.avma.org/issues/animal_welfare/euthanasia.pdf
Necropsia:
Necros: muerto; opsia: observación
Cuando? Donde? Para que? Con que?
Lo antes posible
Lugar mas adecuado
Determinar causa de muerte, motivos: legal, familiar, prevención de rodeo o criadero
Elementos para la necropsia
Elementos para la necropsia
Vestimenta: ambo/overall, botas de goma, guantes de goma, o guardapolvo, cubrecalzado impermeable, guantes de cirugía
Elementos de apertura del cadáver: Cuchillo, chaira, tijera, bisturí, pinzas de mano izquierda, costótomo, sierra
Elementos para toma de muestra: Frascos, soluciones fijadoras, hisopos, tubos, medios de transporte, portaobjetos, papel, lápiz, alcohol, medios de transporte, cinta para rotular
Elementos de bioseguridad: Barbijo, anteojos
Extras: Cámara digital, grabadora
Alteraciones postmortem
1) Rigor mortis: Rigidez muscular que aparece después de la muerte, a medida que el ATP disminuye. Su velocidad de aparición varía con el estado nutricional previo, actividad previa, y temperatura. Aparece entre 1 a 6 horas. Desaparece a las 24 - 48 hs. por la desnaturalización proteica
2) Algor mortis: Enfriamiento gradual posterior a la muerte
3) Livor mortis - Congestión hipostática: Lividez cadavérica, coloración morado/azulada en partes declives
4) Palor mortis: Palidez cadavérica
5) Pseudomelanosis: sulfohemoglobina producto de la combinación de la Hb con SH2
6) Imbibición hemoglobínica y biliar
7) Autólisis postmortem: reblandeciemiento de los tejidos (no es necrosis! por definición)
8) Timpanismo postmortem: formación de gas en vísceras huecas con desplazamiento de vísceras
Técnica de necropsia:
Examen externo
Inspeccionar del pelaje, las plantas y uñas, pezuñas o cascos, y los orificios externos
Identificar ectoparasitos
Estado de nutrición (Obeso, sobrepeso, bueno, regular, malo, caquéctico)
Según la especie tumbar el animal sobre la espalda o un lateral (Rumiantes DLI, equinos DLD)
Determinar sexo y edad (formula dentaria)
Apertura del cadáver
Según la sospecha conviene en algunos casos invertir el orden, y/o tomar directamente muestras para cultivo o pruebas específicas (hemocultivo, cerebro, barro esplénico) antes de proceder a la necropsia completa
Efectuar un corte longitudinal a través de la piel, a lo largo de la línea media ventral desde la sínfisis mandibular hasta el ano, pasar el corte por un lado glándula mamaria o pene
Desollar la piel hacia los laterales en pequeños o lateral en grandes animales
En animales grandes: Cortar musculatura subescapular, músculos abductores y desarticular la articulación coxofemoral, voltear los miembros
En animales grandes: Cortar la pared abdominal en línea media luego hacia dorsal hacia el ala del ileon, luego paralelo a la columna hacia última costilla
Sacar musculatura del tórax y cortar las costillas en uniones costocondrales y articulaciones costovertebrales
En animales grandes: Sacar toda la pared lateral
En animales pequeños: Cortar por línea alba y por uniones costocondrales y retirar el esternón para exponer todos los órganos
Inspeccionar los órganos in situ.
Presencia de liquido, sangre u otro en cavidades?
Desarticular la lengua y separar esófago y traquea, corazón y pulmones hasta el diafragma y extraer los órganos de cavidad torácica junto con esófago, traquea y lengua.
Debridar el resto del tracto gastrointestinal, para extraer las vísceras abdominales
Extraer el bazo, extraer ambos riñones junto con sus glándulas adrenales
Extraer órganos reproductivos (hembras)
Cortar masas musculares del cuello, desarticular la cabeza y separarla del tronco
Inspección de vísceras
En cuanto a las vísceras es preferible trabajar por apartados, de lo mas limpio a lomas contaminado, es decir por último el tracto digestivo y empezando por el los sistemas respiratorio y cardiovascular
Inspección de aparato respiratorio, linfonódulos y apertura de corazón
Inspección de bazo, hígado, sistema urinario, sistema genital
Apertura del tracto gastrointestinal, inspección del páncreas y
linfonódulos mesesntéricos
Apertura del cráneo y extracción de cerebro y cerebelo
Toma y remisión de muestras
Análisis de laboratorio
Hematología y serología
Bacteriología / Micología
Virología
Parasitología
Histopatología
Citología
Toxicología
Genéticos
PROTOCOLO !!!!
A) Rótulo identificatorio: material enviado y el conservador o fijador utilizado
B) Información:
1) Datos del profesional
2) Datos del propietario
3) Datos del animal: especie, raza, edad, pelaje, sexo, marcas y señales/nombre
4) Datos de la muestra: fecha de extracción, zona de la cual se extrajo, y descripción macroscópica
5) Breve historia clínica: signos, evolución, tratamiento, estudios complementarios realizados
6) Morbilidad y mortalidad si es un rodeo o criadero
7) Diagnóstico presuntivo
C) Análisis requerido
Hematología y serología
Muestras a remitir: Sangre, plasma, suero.
Forma de envío:
Sangre con anticoagulante: refrigerada (4 -5 °C)
Plasma: refrigerado o congelado (-20°)
Suero: refrigerado o congelado
Frotis fijado al aire o con alcohol metílico
Observaciones: No dejar frotis al alcance de insectos
Anticoagulantes: EDTA 1mg/ml de sangre, Heparina al 1%: 0,5ml/ 5ml de sangre, Citrato de sodio: 0,5ml/ 5ml de sangre
Evitar hemólisis
Enfermedades infecciosas: enviar 2 muestras con 3 semanas de diferencia (titulación / serconversión)
Bacteriología
Muestras a remitir: trozos de órganos, líquidos corporales, secreciones, exudados, contenido estomacal e intestinal, sangre, hisopados, médula ósea
Forma de envío:
En recipientes, jeringas, tubos de ensayo estériles refrigerados (4-5°C)
En medios de cultivo comerciales
Observaciones: Animal muerto recientemente. Si supera las 3 o 4 horas tomar un hueso largo como muestra (septicemia).
Utilizar material estéril
Rociar con alcohol la superficie de los órganos a muestrear
Virología
Material a remitir:
Suero, líquidos corporales, exudados, órganos.
Forma de envío: Refrigeradas (4-5°C) o congelados (-20° C)
Consultar según el tipo de virus sospechado.
Observaciones:
Las muestras deben provenir de un animal muerto recientemente
Se deben tomar en el período agudo de la enfermedad
Suero: Tomar dos muestras del mismo animal con tres semanas de diferencia
Parasitología
Muestras a remitir y forma de envío:
Materia fecal: en frascos con formol al 5 %. (Pool o seriada de tres días)
Parásitos internos: en alcohol 70° o con formol al 5%.
Parásitos externos: en recipientes herméticos
Raspajes de piel: entre dos portaobjetos, porta y cubreobjetos, con vaselina líquida
Hemoprotozooarios: Frotis secados al aire y/o fijados con alcohol metílico. (Sangre periférica)
Histopatología
Recipiente de boca ancha y buen cierre (preferentemente de plástico)
Líquido fijador – Formol 10 % (o Formaldheído al 4%)
(si es bufferado mejor)
Muestra de 0,5 cm. (a 1 cm.) de espesor (feteada)
Material lo más fresco posible. Tomar tejido normal y tejido afectado
Temperatura ambiente, nunca congelar una pieza
PROTOCOLO !!!!
¿¿¿ Formol al 10% ???
Aldehídos fijadores: Formaldehído, Glutaraldehido, Paraformaldehido
Formaldehído (gas), 37 - 40 % en agua = Formol puro
Formol puro (Formaldehído 40%) 100 ml + Agua destilada 900 ml= 1 litro de formol al 10 %
Si agregan Fosfato monosódico 4 g y fosfato disódico 6,5 g = 1 litro de formol al 10 % bufferado
Eutanasia : Eu: bueno; tanatos: muerte
Sacrificio: Tolera cierto sufrimiento del animal
Autopsia: Auto: uno mismo; opsia: observación
Necropsia: Necros: muerto; opsia: observación
Eutanasia
Criterios básicos
1) Menor estresante posible y con mínimo dolor.
2) Pérdida de la conciencia rápida e indolora.
3) “ Idiot proof ”
Criterios a evaluar
Generales
1) Rápido
2) Confiable
3) Seguro para el personal
4) Irreversible
Particulares
5) Compatibilidad con el motivo del sacrificio (dolor aceptable)
6) No impresionante para observadores
7) Compatibilidad con la especie
8) Que conserve los tejidos
9) Que utilice drogas de fácil adquisición
10) Económico
11) Que no desgaste el equipo
12) Que aisle de carroñeros
Mecanismo de acción de los agentes eutanásicos
1) Hipoxia (directa o indirecta)
2) Depresión neuronal directa
3) Disrupción de actividad cerebral
Agentes eutanásicos
1) Gases
2) Agentes químicos inyectables
3) Agentes físicos
1) Gases:
Generalidades: rápida perdida de la conciencia, si el equipo funciona bien y esta bien mantenido, la mayoría son levemenete peligrosos para el personal. No recomendados en neonatos o reptiles y anfibios
Anestésicos (halotano, enfluorano etc.)(N2O)
Dióxido de carbono (CO2)
Monóxido de carbono (CO)
Nitrógeno
2) Agentes químicos inyectables:
Generalidades: Método rápido para casos individuales, moderado estrés en sujeción e inoculación
Barbitúricos (tiopental sódico)
Generalidades: Rápido depresor del SNC. i.v. inconciencia en 20 seg. paro cardíaco en 5 min aprox.; i.p. aproximadamente 3 veces mas lento.
Ventajas: económico, rápido
Desventajas: Dificultad de la aplicación i.v., dificultad para conseguir la droga según leyes de cada país, severa esplenomegalia artificial.
Recomendado: en la mayoría de los casos, para bajo número de animales o casos individuales, no sirve para animales de consumo y se puede usar en combinaciones.
Combinaciones de barbitúricos
Se pueden combinar con cardiotóxicos, ej: Sn. saturada de cloruro de potasio, procaína 50% (Eutanasico equino ®), difenilhidantoína (Euthanyle ®) o agentes físicos.
Agentes físicos:
Generalidades: de uso rutinario para sacrificio de animales de consumo, por no dejar restos en carne y permitir un sangrado eficaz (legislación)
En tareas de laboratorio o toma de muestras de animales chicos
Dislocación cervical
Decapitación
Inductores de inconciencia
Concusión
Pistola de proyectil cautivo
Electroshock
Exanguinación:
Generalidades: debe ser utilizado con un inductor de inconciencia (concusión, electroshock, CO2, etc.)
Ventajas: No se contaminan los tejidos, permite sangrar bien carnes para consumo
Desventajas: puede ser estresante para los animales, desagradable a la vista, levemente peligroso para el personal.
Recomendado: En animales destinados a consumo
Armas de fuego:
Generalidades: rápido, el personal necesita estar bien entrenado, legislación
Ventajas: permite no acercarse o inmovilizar al animal
Desventajas: puede ser peligroso para el personal y las personas o animales en las proximidades (y no tan próximas), nociones de anatomía muy claras
Recomendado: Animales silvestres, animales agresivos, o con enfermedades zoonóticas
Microondas
(¡¡¡No es un horno convencional!!!)
Generalidades: muy rápido, muy caro
Ventajas: Rápido, no contamina tejidos, fija prácticamente in vivo al cerebro
Desventajas: Muy caro
Recomendado: Para piezas a procesar para neurobiología, cualquier otra aplicación de sacrificios individuales si se cuenta con el equipo
Link para descargar la guía de eutanasia:
http://www.avma.org/issues/animal_welfare/euthanasia.pdf
Necropsia:
Necros: muerto; opsia: observación
Cuando? Donde? Para que? Con que?
Lo antes posible
Lugar mas adecuado
Determinar causa de muerte, motivos: legal, familiar, prevención de rodeo o criadero
Elementos para la necropsia
Elementos para la necropsia
Vestimenta: ambo/overall, botas de goma, guantes de goma, o guardapolvo, cubrecalzado impermeable, guantes de cirugía
Elementos de apertura del cadáver: Cuchillo, chaira, tijera, bisturí, pinzas de mano izquierda, costótomo, sierra
Elementos para toma de muestra: Frascos, soluciones fijadoras, hisopos, tubos, medios de transporte, portaobjetos, papel, lápiz, alcohol, medios de transporte, cinta para rotular
Elementos de bioseguridad: Barbijo, anteojos
Extras: Cámara digital, grabadora
Alteraciones postmortem
1) Rigor mortis: Rigidez muscular que aparece después de la muerte, a medida que el ATP disminuye. Su velocidad de aparición varía con el estado nutricional previo, actividad previa, y temperatura. Aparece entre 1 a 6 horas. Desaparece a las 24 - 48 hs. por la desnaturalización proteica
2) Algor mortis: Enfriamiento gradual posterior a la muerte
3) Livor mortis - Congestión hipostática: Lividez cadavérica, coloración morado/azulada en partes declives
4) Palor mortis: Palidez cadavérica
5) Pseudomelanosis: sulfohemoglobina producto de la combinación de la Hb con SH2
6) Imbibición hemoglobínica y biliar
7) Autólisis postmortem: reblandeciemiento de los tejidos (no es necrosis! por definición)
8) Timpanismo postmortem: formación de gas en vísceras huecas con desplazamiento de vísceras
Técnica de necropsia:
Examen externo
Inspeccionar del pelaje, las plantas y uñas, pezuñas o cascos, y los orificios externos
Identificar ectoparasitos
Estado de nutrición (Obeso, sobrepeso, bueno, regular, malo, caquéctico)
Según la especie tumbar el animal sobre la espalda o un lateral (Rumiantes DLI, equinos DLD)
Determinar sexo y edad (formula dentaria)
Apertura del cadáver
Según la sospecha conviene en algunos casos invertir el orden, y/o tomar directamente muestras para cultivo o pruebas específicas (hemocultivo, cerebro, barro esplénico) antes de proceder a la necropsia completa
Efectuar un corte longitudinal a través de la piel, a lo largo de la línea media ventral desde la sínfisis mandibular hasta el ano, pasar el corte por un lado glándula mamaria o pene
Desollar la piel hacia los laterales en pequeños o lateral en grandes animales
En animales grandes: Cortar musculatura subescapular, músculos abductores y desarticular la articulación coxofemoral, voltear los miembros
En animales grandes: Cortar la pared abdominal en línea media luego hacia dorsal hacia el ala del ileon, luego paralelo a la columna hacia última costilla
Sacar musculatura del tórax y cortar las costillas en uniones costocondrales y articulaciones costovertebrales
En animales grandes: Sacar toda la pared lateral
En animales pequeños: Cortar por línea alba y por uniones costocondrales y retirar el esternón para exponer todos los órganos
Inspeccionar los órganos in situ.
Presencia de liquido, sangre u otro en cavidades?
Desarticular la lengua y separar esófago y traquea, corazón y pulmones hasta el diafragma y extraer los órganos de cavidad torácica junto con esófago, traquea y lengua.
Debridar el resto del tracto gastrointestinal, para extraer las vísceras abdominales
Extraer el bazo, extraer ambos riñones junto con sus glándulas adrenales
Extraer órganos reproductivos (hembras)
Cortar masas musculares del cuello, desarticular la cabeza y separarla del tronco
Inspección de vísceras
En cuanto a las vísceras es preferible trabajar por apartados, de lo mas limpio a lomas contaminado, es decir por último el tracto digestivo y empezando por el los sistemas respiratorio y cardiovascular
Inspección de aparato respiratorio, linfonódulos y apertura de corazón
Inspección de bazo, hígado, sistema urinario, sistema genital
Apertura del tracto gastrointestinal, inspección del páncreas y
linfonódulos mesesntéricos
Apertura del cráneo y extracción de cerebro y cerebelo
Toma y remisión de muestras
Análisis de laboratorio
Hematología y serología
Bacteriología / Micología
Virología
Parasitología
Histopatología
Citología
Toxicología
Genéticos
PROTOCOLO !!!!
A) Rótulo identificatorio: material enviado y el conservador o fijador utilizado
B) Información:
1) Datos del profesional
2) Datos del propietario
3) Datos del animal: especie, raza, edad, pelaje, sexo, marcas y señales/nombre
4) Datos de la muestra: fecha de extracción, zona de la cual se extrajo, y descripción macroscópica
5) Breve historia clínica: signos, evolución, tratamiento, estudios complementarios realizados
6) Morbilidad y mortalidad si es un rodeo o criadero
7) Diagnóstico presuntivo
C) Análisis requerido
Hematología y serología
Muestras a remitir: Sangre, plasma, suero.
Forma de envío:
Sangre con anticoagulante: refrigerada (4 -5 °C)
Plasma: refrigerado o congelado (-20°)
Suero: refrigerado o congelado
Frotis fijado al aire o con alcohol metílico
Observaciones: No dejar frotis al alcance de insectos
Anticoagulantes: EDTA 1mg/ml de sangre, Heparina al 1%: 0,5ml/ 5ml de sangre, Citrato de sodio: 0,5ml/ 5ml de sangre
Evitar hemólisis
Enfermedades infecciosas: enviar 2 muestras con 3 semanas de diferencia (titulación / serconversión)
Bacteriología
Muestras a remitir: trozos de órganos, líquidos corporales, secreciones, exudados, contenido estomacal e intestinal, sangre, hisopados, médula ósea
Forma de envío:
En recipientes, jeringas, tubos de ensayo estériles refrigerados (4-5°C)
En medios de cultivo comerciales
Observaciones: Animal muerto recientemente. Si supera las 3 o 4 horas tomar un hueso largo como muestra (septicemia).
Utilizar material estéril
Rociar con alcohol la superficie de los órganos a muestrear
Virología
Material a remitir:
Suero, líquidos corporales, exudados, órganos.
Forma de envío: Refrigeradas (4-5°C) o congelados (-20° C)
Consultar según el tipo de virus sospechado.
Observaciones:
Las muestras deben provenir de un animal muerto recientemente
Se deben tomar en el período agudo de la enfermedad
Suero: Tomar dos muestras del mismo animal con tres semanas de diferencia
Parasitología
Muestras a remitir y forma de envío:
Materia fecal: en frascos con formol al 5 %. (Pool o seriada de tres días)
Parásitos internos: en alcohol 70° o con formol al 5%.
Parásitos externos: en recipientes herméticos
Raspajes de piel: entre dos portaobjetos, porta y cubreobjetos, con vaselina líquida
Hemoprotozooarios: Frotis secados al aire y/o fijados con alcohol metílico. (Sangre periférica)
Histopatología
Recipiente de boca ancha y buen cierre (preferentemente de plástico)
Líquido fijador – Formol 10 % (o Formaldheído al 4%)
(si es bufferado mejor)
Muestra de 0,5 cm. (a 1 cm.) de espesor (feteada)
Material lo más fresco posible. Tomar tejido normal y tejido afectado
Temperatura ambiente, nunca congelar una pieza
PROTOCOLO !!!!
¿¿¿ Formol al 10% ???
Aldehídos fijadores: Formaldehído, Glutaraldehido, Paraformaldehido
Formaldehído (gas), 37 - 40 % en agua = Formol puro
Formol puro (Formaldehído 40%) 100 ml + Agua destilada 900 ml= 1 litro de formol al 10 %
Si agregan Fosfato monosódico 4 g y fosfato disódico 6,5 g = 1 litro de formol al 10 % bufferado
(No es TAN complicado, or is it?)
Citología
Material a remitir: Frotis o extendidos obtenidos por:
Improntas
Aspiración con aguja fina: con jeringas de 2,5 a 10 ml, y agujas hipodérmicas 20 a 25 gauge
Citología exfoliativa
Fluídos Improntas, swabs, raspajes, cepillados
Forma de envío: fijados al aire o con alcohol metílico.
Toma de muestra para citología. Que esperar ????? concientizar al propietario de los alcances de la técnica.
Toxicología
Muestras: Sangre heparinizada 10 ml- suero 5 ml- orina 50 ml- contenido estomacal- encéfalo- hígado- bazo- riñón- tejido adiposo (100 gr) alimentos, agua, plantas, y cualquier material extraño
Forma de envío: Recipientes limpios o bolsas de polietileno nuevas
Observaciones:
Especificar de qué tóxico se sospecha.
Enviar, si se puede, la fuente del tóxico.
En el caso de minerales: usar frascos químicamente limpios, tratados con ácido clorhídrico 10% durante 24hs y enjuagados varias veces con agua destilada.
Genéticos:
PCR: Polimerase chain reaction
Material a remitir: líquidos corporales, exudados, órganos, fragmentos de tejido
Forma de envío: Congeladas (-20° C o -196 ° C N2) -Consultar según el tipo de virus sospechado
Observaciones: Consultar con el laboratorio sobre todo por los primers con los que cuenten